Une honetan Javascript desgaituta dago zure arakatzailean.Javascript desgaituta dagoenean, webgune honetako funtzio batzuk ez dira funtzionatuko.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Zientzia Saila, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalunia, Espainia * Egile hauek lan honi buruzko zenbait ikuspegi dituzte Equal ekarpenaren aurrekariak: Azido hialuronikoa (HA) naturan sortzen den polisakarido bat da, betegarri dermikoen ekoizpenean helburu estetikoetarako erabiltzen dena.Giza ehunetan hainbat eguneko erdi-bizitza duenez, HAn oinarritutako betegarri dermikoak kimikoki aldatzen dira gorputzean bizitza luzatzeko.HA-n oinarritutako betegarri komertzialen aldaketa ohikoena 1,4-butanodiol diglizidil eteraren (BDDE) gurutzatzeko agente gisa erabiltzea da HA kateak gurutzatzeko.Hondar- edo erreakzionatu gabeko BDDE ez-toxikotzat jotzen da milioi bakoitzeko <2 zati (ppm);beraz, azken betegarri dermikoan hondar BDDE kuantifikatu behar da pazientearen segurtasuna bermatzeko.Materialak eta metodoak: azterketa honek BDDE eta HAren arteko gurutzaketa-erreakzioaren azpiproduktu baten detekzioa eta karakterizazioa deskribatzen du baldintza alkalinoetan, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria (LC-MS) konbinatuz.Emaitzak: Azterketa ezberdinen ondoren, HA-BDDE hidrogela desinfektatzeko erabilitako baldintza alkalinoak eta tenperatura altuak azpiproduktu berri hau, “propilenglikol-antzeko” konposatuaren sorrera bultzatu zutela ikusi zen.LC-MS analisiak baieztatu zuen azpiproduktuak BDDEren masa monoisotopiko bera duela, atxikipen denbora (tR) eta UV xurgapen (λ=200 nm) modu desberdina duela.BDDE ez bezala, LC-MS analisian ikusi zen neurketa baldintza berdinetan, azpiproduktu honek detekzio-tasa handiagoa duela 200 nm-tan.Ondorioa: emaitza hauek konposatu berri honen egituran epoxidorik ez dagoela adierazten dute.Eztabaida zabalik dago HA-BDDE hidrogelaren (HA betegarri dermal) ekoiztean aurkitzen den azpiproduktu berri honen arriskua helburu komertzialetarako.Gako-hitzak: azido hialuronikoa, HA betegarri dermikoa, gurutzatutako azido hialuronikoa, BDDE, LC-MS analisia, BDDE azpiproduktua.
Azido hialuronikoan (HA) oinarritutako betegarriak dira helburu kosmetikoetarako erabiltzen diren betegarri dermiko ohikoenak eta ezagunenak.1 Betegarri dermiko hau hidrogel bat da, normalean %95 urez eta %0,5-3 HAz osatua, eta horrek gel itxurako egitura ematen die.2 HA polisakarido bat da eta ornodunen zelula kanpoko matrizearen osagai nagusia.Osagaietako bat.(1,4)-azido glukuroniko-β (1,3)-N-acetilglukosamina (GlcNAc) lotura glikosidikoen bidez loturiko disakarido-unitate errepikakorrak ditu.Disakaridoen eredu hori berdina da organismo guztietan.Proteinetan oinarritutako betegarri batzuekin alderatuta (adibidez, kolagenoa), propietate honek HA oso biobateragarria den molekula bihurtzen du.Betegarri hauek pazientearen immunitate-sistemak ezagutu dezakeen aminoazidoen sekuentziaren espezifikotasuna izan dezakete.
Betegarri dermiko gisa erabiltzen denean, HAren muga nagusia ehunen barruko fakturazio azkarra da, hialuronidasa izeneko entzima familia zehatz baten presentzia dela eta.Orain arte, HAren egituran hainbat aldaketa kimiko deskribatu dira ehunetan HAren erdi-bizitza handitzeko.3 Aldaketa horietako gehienak hialuronidasa polimero polisakaridoetarako sarbidea murrizten saiatzen dira HA kateak gurutzatuz.Hori dela eta, HA egituraren eta gurutzaketa-agentearen arteko zubiak eta molekularteko lotura kobalenteen eraketa dela eta, gurutzatutako HA hidrogelak HA naturalak baino entzimaren aurkako degradazio-produktu gehiago sortzen ditu.4-6
Orain arte, gurutzatutako HA ekoizteko erabiltzen diren gurutzaketa-agente kimikoak metakrilamida, 7 hidrazida, 8 karbodiimida, 9 divinil sulfona, 1,4-butanodiol diglicidil eterra (BDDE) eta poli(etilenglikol) diglicidil eterra dira.10,11 BDDE da gaur egun gehien erabiltzen den gurutzaketa-agentea.Hidrogel mota hauek hamarkadetan seguruak direla frogatu bada ere, erabiltzen diren gurutzaketa-agenteak erreaktibo erreaktiboak dira, zitotoxikoak eta, kasu batzuetan, mutagenikoak izan daitezkeenak.12 Beraz, azken hidrogelean duten hondar edukia handia izan behar da.BDDE segurutzat jotzen da hondar-kontzentrazioa milioiko 2 zati (ppm) baino txikiagoa denean.4
Hondar baxuko BDDE kontzentrazioa, gurutzatze-maila eta ordezkapen-posizioa HA hidrogeletan detektatzeko hainbat metodo daude, hala nola, gas-kromatografia, masa-espektrometriarekin (MS) eta masa-espektrometriarekin bateratutako tamaina-esklusio-kromatografia, erresonantzia magnetiko nuklearra (NMR) fluoreszentzia neurtzeko metodoak, eta Diodo-matrizea errendimendu handiko kromatografia likidoa (HPLC) akoplatua.13-17 Azterketa honek BDDE eta HAren erreakzioz baldintza alkalinoetan sortutako HA hidrogel gurutzatuaren amaierako azpiproduktu baten detekzioa eta karakterizazioa deskribatzen du.HPLC eta likido kromatografia-masa espektrometria (LC-MS analisia).BDDEren azpiproduktu honen toxikotasuna ezezaguna denez, bere hondakinen kuantifikazioa azken produktuan BDDErekin egin ohi den metodoaren antzera zehaztea gomendatzen dugu.
Lortutako HAren sodio-gatzak (Shiseido Co., Ltd., Tokio, Japonia) ~1.368.000 Da-ko pisu molekularra du (Laurent metodoa) 18 eta berezko biskositatea 2,20 m3/kg-koa.Crosslinking erreakziorako, BDDE (≥% 95) Sigma-Aldrich Co.-ri (St. Louis, MO, AEB) erosi zen.7,4 pH-a duen fosfato tamponatuko gatz salina Sigma-Aldrich konpainiari erosi zitzaion.LC-MS analisian erabilitako disolbatzaile, azetonitrilo eta ura HPLC kalitateko kalitatetik erosi ziren.Azido formikoa (% 98) erreaktibo maila gisa erosten da.
Esperimentu guztiak UPLC Acquity sistema batean egin ziren (Waters, Milford, MA, AEB) eta elektrospray ionizazio-iturri batekin hornitutako API 3000 kuadrupolo hirukoitzeko masa espektrometro batera konektatuta (AB SCIEX, Framingham, MA, AEB).
Gurutzatutako HA hidrogelen sintesia 198 mg BDDE gehituz hasi zen 10% (p/w) sodio hialuronato (NaHA) disoluzioari, %1 alkali (sodio hidroxidoa, NaOH) aurrean.Erreakzio-nahastean azken BDDE kontzentrazioa 9,9 mg/mL (0,049 mM) izan zen.Ondoren, erreakzio-nahasketa ondo nahastu eta homogeneizatu eta 45 °C-tan 4 orduz jarraitzeko utzi zen.19 Erreakzioaren pHa ~12an mantentzen da.
Ondoren, erreakzio-nahasketa urarekin garbitu eta azken HA-BDDE hidrogela iragazi eta PBS bufferarekin diluitu zen 10 eta 25 mg/mL arteko HA kontzentrazioa eta 7,4ko azken pH-a lortzeko.Ekoiztutako HA hidrogel gurutzatuak esterilizatzeko, hidrogel hauek guztiak autoklabean jartzen dira (120 °C 20 minutuz).BDDE-HA hidrogel araztua 4 °C-tan gordetzen da azterketa arte.
Gurutzatutako HA produktuan dagoen BDDE aztertzeko, 240 mg-ko lagin bat pisatu eta erdiko zuloan sartu zen (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, AEB; bolumena 0,5 ml) eta 10.000 rpm zentrifugatu zen giro-tenperaturan. 10 minutu.Guztira 20 µL pull-down likido bildu eta aztertu ziren.
BDDE estandarra (Sigma-Aldrich Co) baldintza alkalinoetan aztertzeko (%1, %0,1 eta %0,01 NaOH), baldintza hauek betetzen badira, lagin likidoa 1:10, 1:100 edo gehienez. 1:1.000.000 Beharrezkoa izanez gero, erabili MilliQ ur deionizatua analisirako.
Gurutzatze-erreakzioan erabilitako hasierako materialetarako (HA % 2, H2O, % 1 NaOH eta 0,049 mM BDDE), material horietatik prestatutako lagin bakoitzeko 1 ml aztertu dira analisi-baldintza berdinak erabiliz.
Ioien mapan agertzen diren gailurren espezifikotasuna zehazteko, 100 ppb BDDE soluzio estandarraren (Sigma-Aldrich Co) 10 µL gehitu ziren 20 µL laginari.Kasu honetan, lagin bakoitzean estandarraren azken kontzentrazioa 37 ppb-koa da.
Lehenik eta behin, prestatu BDDE stock-disoluzioa 11.000 mg/L (11.000 ppm) kontzentrazioa duen BDDE estandarren 10 μL (Sigma-Aldrich Co) 990 μL MilliQ urarekin (dentsitatea 1,1 g/mL) diluituz.Erabili disoluzio hau 110 µg/L (110 ppb) BDDE disoluzioa prestatzeko tarteko diluzio estandar gisa.Ondoren, erabili tarteko BDDE estandar diluentea (110 ppb) kurba estandarra prestatzeko, tarteko diluentea hainbat aldiz diluituz nahi den kontzentrazioa lortzeko 75, 50, 25, 10 eta 1 ppb.1. Irudian ikusten den bezala, BDDE kurba estandarrak 1,1 eta 110 ppb-ra arteko linealtasun ona duela ikusten da (R2>0,99).Kurba estandarra lau esperimentu independentetan errepikatu zen.
1. Irudia LC-MS analisiaren bidez lortutako BDDE estandarraren kalibrazio-kurba, non korrelazio ona ikusten den (R2>0,99).
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria.
Gurutzatutako HAn dauden BDDE estandarrak eta oinarrizko soluzioan BDDE estandarrak identifikatu eta kuantifikatzeko, LC-MS analisia erabili da.
Bereizketa kromatografikoa LUNA 2,5 µm C18(2)-HST zutabe batean lortu da (50 × 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, AEB) eta analisian zehar giro-tenperaturan mantendu da (25 °C).Fase mugikorra azetonitriloz (A disolbatzailea) eta %0,1eko azido formikoa duten urak (B disolbatzailea) osatzen dute.Fase mugikorra eluzio gradientearen bidez eluitzen da.Gradientea honakoa da: 0 minutu, % 2 A;1 minutu, %2 A;6 minutu, %98 A;7 minutu, %98 A;7,1 minutu, %2 A;10 minutu , % 2 A. Iraupena 10 minutukoa da eta injekzio bolumena 20 µL.BDDEren atxikipen-denbora 3,48 minutu ingurukoa da (esperimentuetan oinarrituta 3,43 eta 4,14 minutu bitartekoa).Fase mugikorra 0,25 ml/min-ko emariarekin ponpatu zen LC-MS analisirako.
BDDEren analisia eta MS bidez kuantifikatzeko, UPLC sistema (Waters) elektrospray ionizazio-iturri batekin hornitutako API 3000 hirukoipoloko masa espektrometro batekin (AB SCIEX) konbinatzen da, eta analisia ioi positibo moduan (ESI+) egiten da.
BDDEn egindako ioi zatien analisiaren arabera, intentsitate handiena duen zatia 129,1 Da-ri dagokion zatia zela zehaztu zen (6. Irudia).Hori dela eta, kuantifikaziorako ioi anitzeko monitorizazio moduan (MIM), BDDEren masa bihurketa (masa-karga erlazioa [m/z]) 203,3/129,1 Da da.Eskaneatu osoa (FS) modua eta produktuaren ioien eskaneatzea (PIS) modua ere erabiltzen ditu LC-MS analisirako.
Metodoaren berezitasuna egiaztatzeko, lagin zuri bat (hasierako fase mugikorra) aztertu da.Lagin hutsean ez da seinalerik hauteman 203,3/129,1 Da-ko masa-bihurketarekin.Esperimentuaren errepikagarritasunari dagokionez, 55 ppb-ko 10 injekzio estandar (kalibrazio-kurbaren erdian) aztertu ziren, eta ondorioz, desbideratze estandar hondar bat (RSD) <%5 (datuak ez dira erakusten).
Hondar BDDE edukia zortzi autoklabe ezberdinetan kuantifikatu zen BDDE gurutzatutako HA hidrogeletan, lau esperimentu independenteri dagozkionak."Materialak eta metodoak" atalean deskribatzen den moduan, kuantifikazioa BDDE diluzio estandarraren erregresio-kurbaren batez besteko balioaren arabera ebaluatzen da, zeina 203,3/129,1 Da BDDE masa-trantsizioan detektatu den gailur bakarrari dagokiona, atxikipenarekin. 3,43 eta 4,14 minutu bitarteko denbora Itxaron gabe.2. irudiak 10 ppb BDDE erreferentzia estandarraren kromatograma adibide bat erakusten du.1. taulak zortzi hidrogel ezberdinen hondar BDDE edukia laburbiltzen du.Balioen tartea 1 eta 2,46 ppb bitartekoa da.Beraz, laginaren hondar BDDE kontzentrazioa onargarria da gizakiak erabiltzeko (<2 ppm).
2. Irudia 10 ppb BDDE erreferentzia estandarraren (Sigma-Aldrich Co), 203,30/129,10 Da LC-MS analisiaren bidez lortutako MS (m/z) trantsizioa (MRM positiboan) analisiaren ioi-kromatograma.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa;MS, masa;m/z, masa-karga erlazioa.
Oharra: 1-8 laginak BDDE gurutzatutako HA hidrogelak dira.Hidrogelean dagoen BDDE-kopurua eta BDDE atxikipen-denboraren gailurra ere jakinarazi dira.Azkenik, atxikipen-denbora desberdinak dituzten gailur berrien existentzia ere jakinarazten da.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;HA, azido hialuronikoa;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa;tR, atxikipen-denbora;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;RRT, atxikipen-denbora erlatiboa.
Harrigarria bada ere, LC-MS ioi-kromatogramaren analisiak erakutsi zuen autoklabatutako gurutzatutako HA hidrogel lagin guztietan oinarrituta, 2,73 eta 3,29 minutu arteko atxikipen-denbora laburragoan gailur gehigarri bat zegoela.Esate baterako, 3. irudiak gurutzatutako HA lagin baten ioi-kromatograma erakusten du, non gailur gehigarri bat agertzen den gutxi gorabehera 2,71 minutuko atxikipen-denbora desberdin batean.Behatutako gailur berriaren eta BDDEren gailurraren artean ikusitako atxikipen-denbora erlatiboa (RRT) 0,79koa izan zen (1. taula).Behatu berri den gailurra LC-MS analisian erabilitako C18 zutabean gutxiago atxikitzen dela dakigunez, gailur berria BDDE baino konposatu polaragoa izan daiteke.
3. Irudia LC-MS bidez lortutako HA hidrogel lagin gurutzatuaren ioi-kromatograma (MRM masa bihurketa 203,3/129,0 Da).
Laburdurak: HA, azido hialuronikoa;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa;RRT, atxikipen-denbora erlatiboa;tR, atxikipen-denbora.
Behatutako gailur berriak erabilitako lehengaietan jatorrian zeuden kutsatzaileak izan daitezkeela baztertzeko, lehengai horiek ere LC-MS analisi-metodo bera erabiliz aztertu dira.Aztertutako hasierako materialen artean ura, %2 NaHA uretan, %1 NaOH uretan eta BDDE erreakzio gurutzatuan erabilitako kontzentrazio berean daude.Erabilitako hasierako materialaren ioi-kromatogramak ez zuen konposatu edo gailurrik erakutsi, eta bere atxikipen-denbora ikusitako gailur berriarekin bat dator.Gertaera horrek baztertu egiten du hasierako materialak analisi-prozedura oztopatu dezakeen konposatu edo substantziarik eduki dezakeela ez ezik, ez dagoela laborategiko beste produktu batzuekin kutsadura gurutzatuaren zantzurik.BDDE eta gailur berrien LC-MS analisiaren ondoren lortutako kontzentrazio-balioak 2. taulan (1-4 laginak) eta ioi-kromatograma 4. irudian erakusten dira.
Oharra: 1-4 laginak autoklabe bidezko BDDE gurutzatutako HA hidrogelak ekoizteko erabiltzen diren lehengaiei dagozkie.Lagin hauek ez ziren autoklabetu.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;HA, azido hialuronikoa;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa.
4. irudia HA eta BDDEren gurutzaketa erreakzioan erabilitako lehengaiaren lagin baten LC-MS kromatogramari dagokio.
Oharra: hauek guztiak gurutzadura-erreakzioa burutzeko erabilitako kontzentrazio eta proportzio berean neurtzen dira.Kromatograma bidez aztertutako lehengaien zenbakiak hauek dira: (1) ura, (2) %2 HA disoluzio urtsua, (3) %1 NaOH disoluzio urtsua.LC-MS analisia 203,30/129,10 Da-ko masa bihurtzeko egiten da (MRM modu positiboan).
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;HA, azido hialuronikoa;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa.
Tontor berriak sortzea ekarri zuten baldintzak aztertu ziren.HA hidrogel gurutzatua ekoizteko erabilitako erreakzio-baldintzek BDDE gurutzadura-agentearen erreaktibotasunean nola eragiten duten aztertzeko, gailur berriak (balizko azpiproduktuak) sortuz, neurketa desberdinak egin dira.Determinazio horietan, azken BDDE gurutzatzailea aztertu eta aztertu dugu, NaOH-ren kontzentrazio ezberdinekin (%0, %1, %0,1 eta %0,01) ur-medio batean tratatu zena, ondoren autoklabea egin edo gabe.Baldintza berdinak simulatzeko bakterioen prozedura HA hidrogel gurutzatua ekoizteko erabiltzen den metodo bera da."Materialak eta metodoak" atalean deskribatzen den moduan, laginaren masaren trantsizioa LC-MS bidez aztertu zen 203,30/129,10 Da-ra.BDDE eta gailur berriaren kontzentrazioa kalkulatzen dira, eta emaitzak 3. taulan ageri dira. Autoklabetu ez ziren laginetan ez zen gailur berririk detektatu, disoluzioan NaOH-ren presentzia gorabehera (1-4 laginak, taula). 3).Autoklabean egindako laginetarako, gailur berriak disoluzioan NaOHren presentzian bakarrik hautematen dira, eta badirudi gailurraren eraketa disoluzioaren NaOH kontzentrazioaren araberakoa dela (5-8 laginak, 3. taula) (RRT = 0,79).5. irudiak ioi-kromatograma baten adibidea erakusten du, autoklabean egindako bi lagin NAOHren presentzian edo ezean.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa.
Oharra: goiko kromatograma: lagina % 0,1eko NaOH ur-disoluzioarekin tratatu eta autoklabetu egin zen (120 °C 20 minutuz).Beheko kromatograma: lagina ez zen NaOHarekin tratatu, baizik eta autoklabea baldintza berdinetan.203.30/129.10 Da-ren masa bihurketa (MRM modu positiboan) LC-MS bidez aztertu zen.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa.
Autoklabean egindako lagin guztietan, NaOHrekin edo gabe, BDDE kontzentrazioa asko murriztu zen (16,6 aldiz arte) (5-8 laginak, 2. taula).BDDE kontzentrazioa gutxitzea tenperatura altuetan urak base (nukleofilo) gisa jar dezakeela BDDEren epoxido-eraztuna irekitzeko 1,2-diol konposatu bat osatzeko izan daiteke.Konposatu honen kalitate monoisotopikoa BDDEaren desberdina da eta, beraz, ez du eraginik izango.LC-MS-k 203,30/129,10 Da-ko masa-aldaketa detektatu du.
Azkenik, esperimentu hauek erakusten dute gailur berrien sorrera BDDE, NAOH eta autoklabe prozesuaren presentziaren araberakoa dela, baina ez duela zerikusirik HArekin.
Gutxi gorabehera 2,71 minutuko atxikipen-denboran aurkitutako gailur berria LC-MS bidez ezaugarritu zen.Horretarako, BDDE (9,9 mg/mL) % 1eko NaOH disoluzio urtsu batean inkubatu eta autoklabetu egin zen.4. taulan, gailur berriaren ezaugarriak BDDE erreferentziazko gailur ezagunarekin alderatzen dira (atxikipen-denbora 3,47 minutu gutxi gorabehera).Bi gailurren ioien zatiketaren analisian oinarrituta, 2,72 minutuko atxikipen-denbora duen gailurrak BDDE gailurraren zati berdinak erakusten dituela ondoriozta daiteke, baina intentsitate ezberdinekin (6. irudia).2,72 minutuko atxikipen-denborari (PIS) dagokion gailurrari dagokionez, 147 Da-ko masan zatitu ondoren gailur biziagoa ikusi zen.Determinazio honetan erabilitako BDDE kontzentrazioan (9,9 mg/mL), bereizketa kromatografikoaren ondoren ultramorearen espektroan absorbantzia-modu desberdinak (UV, λ=200 nm) ere ikusi ziren (7. irudia).2,71 minutuko atxikipen-denbora duen gailurra oraindik ikusten da 200 nm-tan, eta BDDE gailurra ezin da kromatograman ikusi baldintza berdinetan.
4. taula 2,71 minutu inguruko atxikipen-denbora duen gailur berriaren eta BDDE-ren gailurraren ezaugarritze-emaitzak 3,47 minutuko atxikipen-denborarekin
Oharra: emaitza hauek lortzeko, LC-MS eta HPLC analisiak (MRM eta PIS) egin ziren bi gailurretan.HPLC analisirako, 200 nm-ko uhin-luzera duen UV detekzioa erabiltzen da.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;HPLC, errendimendu handiko kromatografia likidoa;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa;m/z, masa-karga erlazioa;PIS, produktua Ion eskaneatzea;argi ultramorea, argi ultramorea.
Oharra: masa zatiak LC-MS analisiaren (PIS) bidez lortzen dira.Goiko kromatograma: BDDE estandarraren lagin zatien masa-espektroa.Beheko kromatograma: detektaturiko gailur berriaren masa-espektroa (BDDE gailurrari lotutako RRT 0,79 da).BDDE% 1 NaOH disoluzioan prozesatu eta autoklabetu egin zen.
Laburdurak: BDDE, 1,4-butanodiol diglizidil eter;LC-MS, kromatografia likidoa eta masa-espektrometria;MRM, erreakzio anitzeko monitorizazioa;PIS, produktu ioien eskaneatzea;RRT, atxikipen-denbora erlatiboa.
7. Irudia 203,30 Da ioi aitzindariaren ioi-kromatograma, eta (A) 2,71 minutuko atxikipen-denbora duen gailur berria eta (B) BDDE erreferentzia estandarraren gailurraren UV detekzioa 3,46 minututan 200 nm-tan.
Ekoitzitako HA hidrogel gurutzatu guztietan, LC-MS kuantifikazioaren ondoren hondar BDDE kontzentrazioa <2 ppm zela ikusi zen, baina analisian gailur ezezagun berri bat agertu zen.Gailur berri hau ez dator bat BDDE produktu estandarrarekin.BDDE produktu estandarrak kalitatezko bihurketa (MRM bihurketa 203.30/129.10 Da) analisi bera ere jasan du MRM modu positiboan.Orokorrean, kromatografia bezalako beste metodo analitiko batzuk erabiltzen dira hidrogeletan BDDE detektatzeko muga-proba gisa, baina detekzio-muga maximoa (LOD) 2 ppm baino apur bat txikiagoa da.Bestalde, orain arte, EMN eta MS erabili dira gurutzatutako HA produktuen azukre-unitate-zatietan HAren gurutzaketa- eta/edo aldaketa-maila ezaugarritzeko.Teknika hauen helburua ez da inoiz izan artikulu honetan deskribatzen dugun kontzentrazio baxuetan hondar BDDE detekzioa kuantifikatzea (gure LC-MS metodoaren LOD = 10 ppb).
Argitalpenaren ordua: 2021-09-01